酶聯(lián)免疫試劑盒是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應(yīng)板)表面，使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗）法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。

　　今天我們?yōu)榇蠹以敿毥庹f酶聯(lián)免疫試劑盒檢測方法：

　　首先我們要從抗體的酶標記及質(zhì)量鑒定、抗原濃度的優(yōu)化、洗滌液及保護液的優(yōu)化、酶標抗體稀釋度的優(yōu)化、底物液的優(yōu)化、底物作用時間的優(yōu)化，然后比較結(jié)果。

　　一、抗體的酶標記及質(zhì)量鑒定：試劑盒收集第一峰即為酶標抗體峰。標記完后用紫外分光光度計在分別在280nm、及403nm處測定酶標記物的A值，計算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結(jié)合率以及標記率。

　　二、包被用緩沖液及最適包被抗原濃度的優(yōu)化：

　　1.包被緩沖液的優(yōu)化：三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標抗體工作濃度為1：400及1：300，用自動酶標儀分析，選擇最佳的包被緩沖液系統(tǒng)。

　　2.最適抗原包被濃度的優(yōu)化：顯色的強度在一定范圍內(nèi)與包被的抗原量成正比，但隨著包被抗原濃度的增加，顯色的強度反而降低，我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。

　　三、封閉液、洗滌液及保護液的優(yōu)化

　　1.封閉液的優(yōu)化：采用文獻報道的方法進行封閉，其封閉液的組成為：10mM磷酸鹽緩沖液含1%的牛血清白蛋白。

　　2.洗滌液的配制：采用文獻報道的方法配制洗滌液。

　　四、酶標板保護液的優(yōu)化：在封閉完后加入保護液于4℃冰箱中孵育放置一個晚上，同時與未做保護的酶標板進行對照，然后將保護的及未保護的酶標板置于37烘箱中放置15天，考察保護液對酶標板的穩(wěn)定性的影響。

　　五、酶標抗體稀釋度、保護液的優(yōu)化

　　1.稀釋度的優(yōu)化：抗原包被濃度為4ug/ml，經(jīng)孵育、洗滌后、顯色終止后，用自動酶標儀分析，選擇A值為1.5左右的酶標抗體稀釋度為最適工作濃度。

　　2.保護液的優(yōu)化：適當?shù)木彌_液以及添加無關(guān)蛋白質(zhì)、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會對對酶標抗體的活性起一定的保護作用，因此我們設(shè)計了一組保護劑用于保護酶標抗體，與未添加任何糖蛋白的酶標抗體做對照。