膠體金是氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，金離子還原后聚合成的一定大小的金顆粒，它由一個(gè)基礎(chǔ)的晶核（11個(gè)金原子形成的二十面體）和包圍在外的雙離子層構(gòu)成（內(nèi)層為負(fù)離子層AuCl2－，外層是帶正電荷的H＋）。由于靜電作用，金顆粒之間相互排斥而懸浮成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，故稱膠體金。 。質(zhì)量差的溶液燒制后，液面有漂浮物，大小不一，形狀各異。膠體金顆粒大小，決定了我們用肉眼觀察到的膠體金溶液顏色，由紅到紫色。

    膠體金一般在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，會(huì)與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，一般稱這種結(jié)合叫靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，它還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，從而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。 

    膠體金標(biāo)記技術(shù)，實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。用于膠體金標(biāo)記的蛋白必須要經(jīng)過前處理，其目的在于1、去除高濃度的鹽分，高濃度的鹽分往往干擾蛋白與膠體金的吸附結(jié)合，或?qū)е履z體金粒子的凝聚，這一步往往采用低濃度緩沖液來進(jìn)行。2、使蛋白分子盡量分散為單體，凍干蛋白或高濃度蛋白溶液中蛋白分子往往凝聚為多聚體大分子，可同時(shí)與多個(gè)膠體金粒子結(jié)合，影響標(biāo)記的靈敏度和定量分析。3、使蛋白具有適當(dāng)?shù)姆肿恿俊５鞍追肿恿窟^?。?0 kD），形成的蛋白復(fù)合體往往是不穩(wěn)定，可短時(shí)間內(nèi)失活。而分子量過大時(shí)，被認(rèn)為影響探針的靈敏度，特別是已知蛋白的結(jié)構(gòu)與活性中心的情況下，去除對(duì)活性影響的結(jié)構(gòu)部分是提高標(biāo)記靈敏度，延長探針壽命（防止凝集）的有效辦法。把分子量過小的蛋白與其它蛋白（如牛血清蛋白等）結(jié)合后，能制備出穩(wěn)定性更強(qiáng)的探針。 

    當(dāng)?shù)鞍浊疤幚硗瓿珊?，接著要確定膠體金與蛋白結(jié)合的*pH值。對(duì)于理化性質(zhì)不確定的蛋白這一步尤為重要。過量的蛋白與不同pH值的膠體金結(jié)合后，只有某一特定pH值能夠形成結(jié)合zui穩(wěn)定的探針。在高濃度電解質(zhì)（如NaCl）作用下不會(huì)凝聚。不同蛋白的適宜pH范圍的寬窄大不相同。一般選擇zui小適宜pH值為*pH值。但有些探針的實(shí)際情況并不*如此，zui穩(wěn)定的探針并不*代表活性，這要靠實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。在確定*pH值后，zui后要確定zui小蛋白量，即能夠形成穩(wěn)定探針的蛋白的zui小量。如果在制備探針時(shí)加入太多的蛋白，不僅造成浪費(fèi)，而且更為嚴(yán)重的是容易造成探針凝聚，并嚴(yán)重影響標(biāo)記活性。因?yàn)樘结樔芤褐械挠坞x蛋白容易搶先與標(biāo)記位點(diǎn)結(jié)合，起到“封閉”（Blocking）作用，而膠體金探針標(biāo)記不上。在標(biāo)記位點(diǎn)希少、被標(biāo)記物含量較少的情況下要特別注意。 

    膠體金具有很高的動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性，在穩(wěn)定因素不受破壞時(shí)自身凝聚極慢，可放置數(shù)年不發(fā)生凝聚。影響穩(wěn)定的因素主要有電解質(zhì)、溶膠濃度、溫度、非電解質(zhì)等。金溶膠必須有少量電解質(zhì)作穩(wěn)定劑，但濃度不宜過高。高濃度親水性非電解質(zhì)能剝?nèi)ツz粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物質(zhì)促使溶膠凝聚，但一定量的高分子物質(zhì)反而可增加溶膠穩(wěn)定性，如蛋白質(zhì)、葡萄糖、PEG20000等的加入有良好的穩(wěn)定效果。

    當(dāng)金溶膠吸附蛋白質(zhì)后，溶膠的穩(wěn)定性隨溶液pH而變化，而這種變化又取決于吸附蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，如ConA，過氧化物酶等，當(dāng)pH較低時(shí)保持穩(wěn)定，提高pH則顯得不穩(wěn)定，接近等電點(diǎn)或略高時(shí)又變得穩(wěn)定了。標(biāo)記后的膠體金溶液可用0.2～0.5mg/ml PEG20000 作為穩(wěn)定劑。在4～10℃貯存數(shù)月有效，不宜冰凍。貯存中可能會(huì)發(fā)生程度不同的凝聚，可離心除去。