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酶聯(lián)免疫試劑盒的使用和注意事項

更新時間:2017-06-30      點擊次數(shù):1604
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)是酶免疫測定技術中應用zui廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。

酶聯(lián)免疫試劑盒的操作使用:
 
1、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
2、甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
3、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
4、酶聯(lián)免疫試劑盒每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
5、取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
6、在450nm波長處測定各孔的OD值。

為保證實驗質量,使用酶聯(lián)免疫試劑盒時需注意:
 
(1)合理安排檢測量,以免反應板過多造成洗板等待時間長。
(2)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
(3)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
(4)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
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