李向梅 韓京朋 蘇麗芳等
北京維德維康生物技術(shù)有限公司,北京 100095
摘要:為研制一種用于檢測(cè)牛奶中嘔吐毒素(deoxynivalenol,DON)殘留的快速檢測(cè)試紙條,試驗(yàn)以人工合成抗原DON-OVA和羊抗鼠二抗為原料,包被硝酸纖維膜;以抗DON單克隆抗體為原料,制備金標(biāo)抗體,并凍干保存于反應(yīng)板微孔中,zui終制備出可用于檢測(cè)牛奶中DON殘留的膠體金快速檢測(cè)試紙條。結(jié)果顯示,該檢測(cè)試紙條檢測(cè)限為100 μg/L,重復(fù)性、特異性均較好,可用于檢測(cè)牛奶中DON殘留。
關(guān)鍵詞:嘔吐毒素;試紙條;牛奶
青貯飼料是指經(jīng)人工調(diào)劑的多汁青飼料,多用于反芻動(dòng)物的冬春季節(jié)飼喂,對(duì)泌乳奶牛尤為重要(白曉燕等,2011)。但青貯飼料在儲(chǔ)存過程中易受到霉菌毒素的污染,奶牛進(jìn)食受霉菌毒素污染的飼料后,不僅會(huì)影響奶牛的生產(chǎn)性能,且會(huì)引起牛奶中霉菌毒素的污染,影響原料奶的安全性(王星凌等,2010;王麗芳等,2011;李笑櫻等,2012)。嘔吐毒素(vomitoxin),又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),是一種無色針狀結(jié)晶,熔點(diǎn)為151~152 ℃,具有較強(qiáng)的熱抗力,121 ℃高壓加熱25 min僅有少量破壞(王金全,2011;林少青等,2009)。DON具有很強(qiáng)的毒性,可導(dǎo)致動(dòng)物腸功能紊亂,引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥狀,且對(duì)免疫系統(tǒng)也有影響,并具有明顯的胚胎毒性和一定的致畸作用,還可能有遺傳毒性(金秀娟等,2010)。1998 年,在癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的評(píng)價(jià)報(bào)告中,DON被列為3 類致癌物(封薇等,2012)。目前,針對(duì)牛奶中DON的檢測(cè)方法主要是儀器方法,免疫分析法還很少,且主要是進(jìn)口產(chǎn)品(周思等,2011;鄭楠等,2012)。為此,本研究擬利用膠體金免疫層析法制備可檢測(cè)牛奶中DON殘留的快速檢測(cè)試紙條,用于基層進(jìn)行大批量樣品的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè),防止DON中毒事件的發(fā)生。
1 材料與方法
1.1 材料 DON、玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品及牛血清白蛋白(BSA)均購自Sigma公司;硝酸纖維素膜(NC膜)、樣品墊、PVC底板、吸水紙均購自上海金標(biāo)生物科技有限公司;膠體金溶液、包被抗原(DON-OVA)、抗DON單克隆抗體均由北京維德維康生物技術(shù)有限公司自制。陰性牛奶樣品均為市售(經(jīng)ELISA試劑盒檢測(cè)確定為DON陰性牛奶)。
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