Elisa測(cè)定結(jié)果的誤差分類與來(lái)源
陳青(北京維德維康生物技術(shù)有限公司)
誤差:elisa測(cè)定結(jié)果與真實(shí)數(shù)值之間的差異叫誤差。誤差可分為隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差兩大類。
隨機(jī)誤差:指某實(shí)驗(yàn)室不同測(cè)定方法之間或同一次測(cè)定不同樣本(但樣本為同一類)之間因隨機(jī)因素引起的實(shí)驗(yàn)誤差,這類誤差可以通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線控制在一定范圍內(nèi)。
系統(tǒng)誤差:指同一實(shí)驗(yàn)室使用不同方法或不同實(shí)驗(yàn)室使用同樣方法之間的誤差。這類誤差常常引起一系列甚至整批樣本的測(cè)量值偏向一側(cè),故又稱為偏差。在elisa中,系統(tǒng)誤差是可以而且應(yīng)該通過(guò)努力降低到可忽略的程度。
Elisa測(cè)定結(jié)果的誤差來(lái)源有兩個(gè)方面:
實(shí)驗(yàn)誤差:即在酶促反應(yīng)和免疫反應(yīng)兩個(gè)過(guò)程中所出現(xiàn)的誤差。如移液誤差(加樣誤差)、稀釋誤差(標(biāo)準(zhǔn)品稀釋)、回歸誤差、錯(cuò)分誤差(分離不*引起)等;
系統(tǒng)誤差:
?因反應(yīng)時(shí)間不正常、反應(yīng)條件不穩(wěn)定、分離過(guò)程不恒定所致的誤差和技術(shù)誤差(樣本和標(biāo)準(zhǔn)品加樣使用不同的加樣器)等。
‚計(jì)數(shù)誤差,包括用酶標(biāo)儀測(cè)量反應(yīng)液OD值過(guò)程中所引起的誤差(如光線、載體板質(zhì)量等對(duì)測(cè)量的影響,酶標(biāo)儀探頭被污染等)和儀器本身的誤差。
ƒ計(jì)算結(jié)果時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合程度和計(jì)算本身引起的誤差(如回歸系數(shù)計(jì)算誤差、濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線兩端樣本的計(jì)算所引起的誤差等)。
由上述內(nèi)容可知elisa測(cè)定的結(jié)果受多方面因素的影響極易出現(xiàn)誤差,尤其elisa是微量分析,又使用了生物試劑,如抗原、抗體、酶標(biāo)記物等。*生物制品是極不穩(wěn)定的,不同批次的生物制品質(zhì)量會(huì)有差異,同一批生物制品在不同保存時(shí)間和不同保存條件下的質(zhì)量也是不同的(即生物制品的性質(zhì)具有可變性和易變形,易受各種因素如:環(huán)境、溫度、時(shí)間等影響)。如果elisa試劑盒生產(chǎn)廠家沒(méi)有完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和方法,那么所生產(chǎn)的產(chǎn)品在檢測(cè)樣本時(shí)就極有可能得出錯(cuò)誤的結(jié)果。因此選擇有嚴(yán)格質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的elisa生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品是十分有必要的。
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