上述問題產(chǎn)生原因

解決方案

檢測樣本

①血清發(fā)生溶血，會出現(xiàn)假陽性；

②血清反復(fù)凍融使抗體效價下降，會出現(xiàn)假陰性；

③血清被細菌污染后反復(fù)凍融，或使用前未混勻，會導(dǎo)致實驗重復(fù)性差。

①采集血清時應(yīng)無菌操作，要求血清清亮無溶血，避免使用嚴(yán)重溶血的血清；

②血清保存時間不能太久，血清解凍后應(yīng)該充分混勻，血清稀釋后在加樣前也要混合均勻，解凍后的血清爭取一次性檢測完畢，如需做多次檢測，建議少量分裝冷凍保存；

③若血清出現(xiàn)渾濁或沉淀，建議離心后取上清檢測。

           試劑盒內(nèi)的試劑和組分

①試劑過期或者不同批號試劑盒的試劑組分混用，會使吸光值發(fā)生偏差；

②試劑在使用過程中受到了污染，試劑反復(fù)回溫，濃縮洗滌液結(jié)晶時沒有溶解就使用；

③酶標(biāo)記物使用不正確或已變質(zhì)均會導(dǎo)致實驗結(jié)果不成立（避光反應(yīng)后不顯色）。

①不要使用過期試劑和混用不同批號的試劑，避免試劑盒分多次使用；

②確認(rèn)酶標(biāo)記物是否來源于本試劑盒，且；避免取出的試劑再倒回原瓶；不要過早將酶標(biāo)記物取出；

③確保使用試劑盒配套的洗滌液；濃縮洗滌液應(yīng)用蒸餾水或去離子水稀釋，如果有結(jié)晶要加熱溶解后再使用。

            實驗室環(huán)境溫度控制

①實驗室溫度過高或者過低都會導(dǎo)致吸光值偏差；

②試劑盒回溫及孵育未按規(guī)定溫度及時間進行。

①保持實驗室溫度在20-25℃，避免在直射光照下或者通風(fēng)口旁操作；試劑盒從冰箱中取出后，需在室溫下放置40min以上，使試劑盒恢復(fù)到室溫再使用，使用后立即放至2-8℃保存；

②回溫及孵育的溫度和時間要力求準(zhǔn)確，孵育時酶標(biāo)板不能疊放，以保證各板的溫度可以平衡。

            實驗人員的操作問題

①在使用加樣器時，操作不正確或者將加樣器吸頭與板孔相接觸，造成污染；

②洗滌液配制不正確或用了不合格的水配制，或使用了錯誤的洗滌液洗板，次數(shù)及方法不正確；手動洗板時用帶紙屑的吸水紙拍板；吸水紙重復(fù)使用，導(dǎo)致酶標(biāo)板污染，均會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；

③試劑添加順序錯誤或遺漏了實驗步驟均會導(dǎo)致酶標(biāo)板不顯色；

④點板時間過長導(dǎo)致的加樣時差也會對結(jié)果產(chǎn)生影響。

①嚴(yán)格按照試劑盒提供的說明書進行操作，試劑添加的順序和步驟要正確；

②在使用加樣器進行加樣時，避免加樣器吸頭與板孔接觸，取樣時要更換吸頭，同時要避免將樣品加在孔壁上或產(chǎn)生氣泡；檢測大量樣品時，應(yīng)使用多道加樣器分批次操作，一次只操作一塊板；先將待檢血清全部稀釋完畢，再點板，以減少延時造成的誤差；

③按照規(guī)定的洗板次數(shù)洗滌，每孔加入的洗滌液不少于規(guī)定的液量，手動洗板時不用帶紙屑的吸水紙拍板，并且避免吸水紙重復(fù)使用。

              儀器設(shè)備問題

①酶標(biāo)儀讀數(shù)出現(xiàn)錯誤；

②加樣器長期使用因機械磨損造成加樣不準(zhǔn)；

③洗板機污染，加液頭堵塞等問題均會導(dǎo)致誤差。

試驗中常用到的酶標(biāo)儀、加樣器、洗板機、恒溫箱及存放試劑的冰箱等儀器設(shè)備要定期維護和校準(zhǔn)，確保儀器設(shè)備正常使用，避免試驗誤差。