孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體,又名堿性綠、嚴(yán)基塊綠、孔雀綠,其既是殺真菌劑,又是染料,易溶于水,溶液呈藍(lán)綠色。長(zhǎng)期以來,漁民都用它來預(yù)防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等,而且為了使鱗受損的魚延長(zhǎng)生命,在運(yùn)輸過程中和存放池內(nèi),也常使用孔雀石綠。
孔雀石綠試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測(cè)產(chǎn)品,能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。
孔雀石綠試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被孔雀石綠抗原,樣品殘留的孔雀石綠和微孔條上預(yù)包被的抗原共同競(jìng)爭(zhēng)抗孔雀石綠抗體,加入酶標(biāo)二抗后,經(jīng)TMB底物顯色,樣品吸光度值與其殘留物孔雀石綠呈負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中孔雀石綠的含量。
操作步驟:
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號(hào):將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。
5加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品:加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50μl/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中,然后加入抗試劑50μl/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液250μl/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、加酶標(biāo)物:加入酶標(biāo)物100μl/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min,取出重復(fù)洗板步驟6。
8、顯色:加入底物液A液50μl/孔,再加底物液B液50μl/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15~20min。
9、測(cè)定:加入終止液50μl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測(cè)定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀,則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。