1、確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。

  2、將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。

  3、酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。

  4、反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗滌2次。

  5、將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。

  6、0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。

  7、將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。

  8、0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。

  9、按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過(guò)程中，要經(jīng)常的觀(guān)察，當(dāng)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有    明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時(shí)，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長(zhǎng)不要超過(guò)30分鐘）。

  10、用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。

  11、根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶(hù)也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。